Pengenalan untuk pemrosesan organisasi

“Pemrosesan tisu” mengacu pada serangkaian langkah yang diperlukan yang menyiapkan tisu hewan atau manusia dari tahap fiksasi hingga kondisi cukup dibenamkan dengan lilin histologi yang tepat, memungkinkan untuk dipisah pada micromom.

Pentingnya pengolahan tisu

Manajer laboratorium sering menegaskan pada pentingnya manajer pemrosesan tisu pada staf mereka. Sangat penting untuk memahami bahwa menggunakan jadwal pemrosesan yang tidak pantas atau membuat kesalahan mendasar (seperti pengisian yang salah atau pengurutan reagen) dapat menyebabkan spesimen tisu tidak dapat dipisah. Ini berarti mereka tidak akan memberikan informasi visual yang berguna. Situasi ini sangat parah pada tisu diagnostik manusia karena seluruh spesimen diproses dalam satu kelompok. Jika tisu rusak dalam kasus seperti itu, mungkin tidak ada jaringan cadangan yang tersedia untuk analisis lebih lanjut, menyebabkan situasi di mana lab harus menjelaskan kepada pasien mengapa diagnosis tidak dapat dibuat. Meskipun kegagalan mekanik atau listrikMesin pengolahan tisu otomatisDapat terjadi, sebagian besar masalah pemrosesan disebabkan oleh kesalahan manusia. Oleh karena itu, menegaskan pentingnya pendidikan dan pelatihan yang tepat bagi personel pengolahan tisu sangat penting. Careness harus berolahraga saat menyiapkan program pemrosesan untuk lari apa pun untuk memastikan hasil terbaik.

Ikhtisar langkah pemrosesan tisu bagian parafin

1. Kumpulkan sampel baru

Sampel jaringan segar berasal dari berbagai sumber dan rentan terhadap kerusakan ketika dihilangkan oleh pasien atau hewan eksperimentalnya. Maka dari itu, mereka harus ditangani dengan hati-hati dan diperbaiki sesegera mungkin setelah pembedahan. Idealnya, fiksasi harus terjadi di tempat ekstraksi, seperti di ruang operasi. Jika tidak memungkinkan, hal ini harus diperbaiki segera setelah tiba di laboratorium.

2. Fiksasi

Spesimen terbenam dalam fixative cair, seperti solusi formaldehida seperti formalin. Agen ini secara bertahap disemprotkan tisu, induksi kimia dan perubahan fisik yang mengeras dan mengatur pengeluaran tisu saat melindunginya selama tahap pemrosesan berikutnya. Hanya beberapa reagen yang cocok untuk fiksasi karena harus memiliki properti tertentu yang cocok untuk tugas ini. Misalnya, komponen tisu harus mempertahankan reaktivitas kimia tertentu untuk menerapkan teknik noda tertentu di kemudian. Formalin (biasanya fosfat-buffered) adalah fixative yang paling umum digunakan untuk memelihara tisu yang akan diproses menjadi bagian parafin. Idealnya, spesimen harus tetap dalam solusi perbaikan cukup lama untuk menghisap semua bagian tisu, diikuti dengan periode yang memungkinkan reaksi fiksasi kimia untuk menyeimbangkan (waktu fiksasi). Umumnya, waktu fiksasi untuk spesimen harus 6 sampai 24 jam. Sebagian besar laboratories mempertimbangkan langkah fiksasi sebagai tahap pertama program pemrosesan. Post-fiksasi, spesimen mungkin memerlukan disction lebih lanjut untuk memilih area yang tepat untuk evaluasi. Spesimen yang diproses ditempatkan dalam kaset berlabel dengan baik (keranjang berlubang kecil) untuk membedakan mereka dari spesimen lain. Durasi penanganan spesimen tergantung pada ukuran dan jenis spesimen terbesar dan terkecil, prosesor tertentu yang digunakan, pelarut yang dipilih, suhu pelarut, dan variabel lainnya.

3. Dehidrasi

Karena lilin parafin cair adalah hidrofobik (tidak dicampur dengan air), perlu untuk menghilangkan sebagian besar air dari sampel sebelum sekuasi lilin. Proses ini biasanya melibatkan contoh dalam serangkaian solusi etanol (alkohol) untuk meningkatkan konsentrasi, puncak dalam etanol absolut. Etanol dapat mencampur dengan air dalam rasio apapun, secara bertahap menggantikan air dalam sampel dengan alkohol. Menggunakan urutan konsentrasi yang meningkat secara bertahap meminimalkan deformasi tisu yang berlebihan.

Untuk sampel tidak lebih tebal dari 4mm, urutan dehidrasi umum adalah:

70% etanol 15 menit

90% etanol 15 menit

100% etanol 15 menit

100% etanol 15 menit

100% etanol 30 menit

100% etanol 45 menit

Pada saat ini, semua air sampel, kecuali untuk jumlah minimum air terikat rapat (molekul), harus dihilangkan.

4. Membersihkan

Waduh padahal jaringan sekarang kandungan air minimum, kita masih ga bisa meresap dengan wax karena wax dan etanol pun ga campur Oleh karena itu, pelarut menengah kompatibel dengan etanol dan lilin parafin harus digunakan. Pelarut ini akan mengganti etanol dalam tisu, yang kemudian akan diganti dengan lilin parafin cair. Fase dari program ini disebut "clearing," dan bahan kimia yang digunakan dikenal sebagai agen clearing ". Istilah" kliring "dipilih karena banyak (namun tidak semua) agen pembersih, karena indeks bias yang relatif tinggi, dapat memberikan beberapa derajat kejernihan optik atau transparansi pada tisu. Produk penting lainnyaFungsi Pembersih adalah untuk menghilangkan sejumlah besar lemak dari tisu, karena lemak akan merusak sekuisi lilin.

Xylene adalah agen pembersih yang umum digunakan, membutuhkan beberapa perubahan untuk mengganti etanol sepenuhnya.

Untuk spesimen tidak lebih tebal dari 4mm, urutan pembersihan umum termasuk: Xylene 20 menit, Xylene lain 20 menit, Xylene 45 menit.

5. Pijatan lilin

Pada tahap ini, tisu dipompa dengan lilin histologis yang sesuai. Meskipun banyak reagen berbeda telah dievaluasi dan digunakan selama beberapa tahun untuk mencapai tugas ini, lilin histologi berbasis parafin tetap menjadi yang paling banyak digunakan. Lilin standar tetap cair pada 60 °C dan dapat diperkenalkan ke dalam tisu pada suhu ini, kemudian didinginkan hingga 20 °C untuk menjadi tekstur yang cocok untuk bagian yang konsisten. Waxes ini terdiri dari parafin yang dimurnikan dan berbagai aditif, mungkin termasuk resin seperti styrene atau polyethylene. Penting untuk memahami bahwa komponen-komponen ini memiliki sifat fisik tertentu, memungkinkan lilin untuk ditempelkan pada irisan tipis 2 mikron, membentuk pita ketika memotong pada mikromom, dan menjaga fleksibilitas yang cukup untuk tetap datar saat mengapung pada bak air hangat.

Untuk sampel tidak boleh lebih tebal 4mm, urutan berisi umum adalah:

Lilin 30 menit

Lilin 30 menit

Lilin 45 menit

6. Embedding atau memblokir

Setelah spesimen direndam secara menyeluruh dengan lilin, spesimen Perlu dibentuk menjadi blok untuk dipasang di mikromom untuk mempartisi. Proses ini melibatkan menggunakan "embedding center", di mana lilin cair dituangkan ke dalam cetakan, dan spesimen ditempatkan di dalamnya. Sangat penting untuk memperhatikan orientasi yang tepat dari spesimen dalam cetakan, karena posisi spesimen akan menentukan "pesawat bagian", yang penting dalam histologi diagnostik dan penelitian. Sebuah cincin embedding kemudian ditempatkan di atas cetakan, lebih banyak lilin ditambahkan, dan seluruh perakitan ditempatkan pada pelat dingin untuk memperkuat. Setelah proses selesai, blok tisu bersama dengan cincin embedding yang terpasang dapat dilepas dari cetakan, siap untuk micromy. Perlu dicatat bahwa jika pemrosesan tisu dilakukan dengan benar, blok lilin yang mengandung spesimen jaringan sangat tahan lama dan dapat berfungsi sebagai bahan arsip penting.